Mastitis test je brza, jeftina i jednostavna orijentacijska metoda. Ona služi za otkrivanje poremećene sekrecije, odnosno za procjenu broja somatskih stanica u mlijeku. Ova se metoda provodi svakodnevno u terenskim uvjetima na brojnim farmama u svijetu.
Somatske stanice mlijeka čine pokrovne (epitelne) stanice žljezdane sluznice vimena i brojna krvna tjelešca (leukociti (neutrofili, makrofagi i limfociti) te eritrociti). Leukociti se nalaze u mlijeku zdravih krava i čine do jedne četvrtine svih somatskih stanica. Njihov broj i odnos se mijenja ovisno o upalnim promjenama u mliječnoj žlijezdi. Broj leukocita naglo poraste prilikom upale ili ozljede mliječne žlijezde.
Upala mliječne žlijezde ili mastitis je jedna od najčešćih i najraširenijih bolesti domaćih životinja. Njeno mlijeko se koristi za konzumaciju (krave, ovce i koze, i dr.). Mastitis može biti klinički s jasno vidljivim kliničkim znakovima (povišena tjelesna temperatura, poremećaj općeg stanja životinje, bolno vime, otečena zahvaćena četvrt (ili polovica) vimena, itd.) i supklinički bez vidljivih kliničkih znakova. Supklinički ili skriveni mastitis se može otkriti laboratorijskim pretragama ili mastitis testom.
Mastitis testovi su jednostavni neizravni pokazatelji povećanog broja somatskih stanica u mlijeku. Tvari ili reagensi koji se koriste u mastitis testu su vodene otopine (površinski aktivne tvari i pokazatelji stupnja kiselosti); one izazivaju pucanje staničnih stijenki leukocita pri čemu se iz leukocita oslobađa dezoksiribonukleinska kiselina (DNK). Ona reakcijom polimerizacije postaje gel (što je više leukocita u mlijeku to nastaje više gela te se poveća viskoznost i obrnuto).
Ova reakcija je praćena promjenom stupnja kiselosti ili pH vrijednosti što izaziva promjenu boje indikatora koji se nalazi u reagensu. Najčešće se u svijetu provodi Kalifornijski mastitis test (engl. California mastitis test (CMT)) pri čemu se koristi reagens s nalauril sulfatom ili Zagrebački mastitis test kojeg proizvodi Hrvatski veterinarski institut u Zagrebu. Zagrebački mastitis reagens sadrži alkilaril sulfonat i indikator pH (brom krezol crveno).
Kako se provodi test?
Testiranje muznih životinja može se jednostavno provoditi u terenskim uvjetima u staji. Pri njemu prije probne mužnje nije potrebna prethodna dezinfekcija sisa. Ujedno nečistoća ili prašina koja slučajno upadne u mlijeko unutar plitice nema utjecaja na ishod reakcije. Testator ima ugrađene četiri plitice za ispitivanje sve četiri četvrti vimena krava; kod ovaca i koza se koriste prve ili zadnje dvije plitice. Plitice su obilježene rimskim brojevima I, II, III i IV. Testiranje se provodi s desne strane životinje osim u izmuzištima ovisno o izvedbi. Kod krave se testator drži tako da prva lijeva četvrt bude iznad broja I plitice, stražnja lijeva iznad II, stražnja desna iznad III i prednja desna iznad IV.
Nakon što se izmuze mlijeko iz određene četvrti u odgovarajuće udubljenje na plitici, testator se nagne da se izbaci višak mlijeka u svim pliticama s namjerom da se sadržaj mlijeka u pliticama izjednači te da ga bude oko 2 ml. U svaku se pliticu istiskuje jednaka količina reagensa, tj. oko 2 ml. Laganim kružnim pokretima testatora miješa se reagens s mlijekom. Rezultat može biti: negativan (-), sumnjiv (?), slabo pozitivan (+), pozitivan (+ +) ili jako pozitivan (+ + +), a ovisi o broju somatskih stanica u mlijeku. Zagrebački mastitis reagens je tamno ljubičaste boje koji pomiješan s istom količinom mlijeka reagira, a ako je povećan broj somatskih stanica, promjenom boje i konzistencije.
Negativan nalaz znači da je vime zdravo. Ako mješavina ostane pepeljastosive boje jednolična ili s malo nitastih tvorbi (broj somatskih stanica (BSS) u 1 mL mlijeka je manji od 300 000). Slabo pozitivna reakcija se očituje već nakon 1 minute s mnoštvo krpičastih tvorbi bez stvaranja gela stanja (300-500 000 BSS/ ml mlijeka označava latentni mastitis).
Pozitivna reakcija se vidi već nakon nekoliko sekundi u obliku zgrušavanja poput bjelanjka jajeta. Ono se dobro primjeti prilikom naginjanja plitice (500 000-2 000 000 BSS/ml). Jako pozitivnu reakciju karakterizira želatinozno zgrušavanje. Pri naglom pokretanju plitice smjesa ostaje kompaktna, a znak je vidljivog mastitisa (više od 2 milijuna BSS/ml mlijeka).
Osim toga, pozitivnu reakciju s mastitis reagensom može dati mlijeko: visoko gravidnih životinja; životinja u početnoj fazi zasušivanja; životinja u zasušenju i do 14 dana poslije porođaja. Pozitivan mastitis test može biti posljedica nekog upalnog procesa izvan mliječne žlijezde; također i kod cjepljenih životinja određenim visoko imunogenim cjepivima. Sve pozitivne i sumnjive uzorke sekreta vimena potrebno je poslati na laboratorijsku pretragu radi utvrđivanja uzroka ili uzročnika upale.
Mastitis test se koristi za neizravno utvrđivanje broja somatskih stanica u sekretu mliječne žlijezde. Sve u svrhu utvrđivanja stupnja poremećene sekrecije pri dijagnostici mastitisa u muznih krava, koza i ovaca. Na nekim farmama, mastitis test se provodi svakodnevno prije svake mužnje; bez obzira na broj životinja, godišnje doba ili dnevni broj mužnji po kravi. Na taj način se pravovremeno sprječava miješanje u zajedničkom spremniku mlijeka životinja s poremećenom sekrecijom i mlijeka zdravih životinja.
