Postupak proizvodnje acidofila započinje standardizacijom mlijeka, homogenizacijom (ujednačavanjem globula mliječne masti) te toplinskom obradom na 95 °C tijekom 60 minuta. Nakon toga se ohladi na temperaturu fermentacije (37°C) te se na toj temperaturi mlijeko drži oko 3 sata, ako su zaostale neke bakterija da se u tom razdoblju aktiviraju.
Nakon toga slijedi druga pasterizacija na 95 °C 10 do 15 minuta te hlađenje na 37 °C. Zatim se u tako pripremljeno mlijeko dodaju bakterije, odnosno Lactobacillus acidophilus. Fermentacija acidofila se provodi pri temperaturi od 37 °C, a može trajati između 18 pa i do 24 sata.
Nakon što se proizvede određena količina kiseline (do 1 %) slijedi brzo hlađenje na temperaturu ispod 5 °C. Acidofil im blago kiselkasto mliječni okus, a ponekad i malo trpak okus.
